淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。
分離原理:外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。
淋巴細(xì)胞分離液的使用方法:
1、準(zhǔn)備無菌的15ml離心管或錐形管;
2、加入淋巴細(xì)胞分離液3ml;(注意:淋巴細(xì)胞分離液使用前需恢復(fù)室溫,18-25℃)
3、Hank~s液或PBS緩沖液1:1比列(如果全血樣本粘稠,可適當(dāng)增大比例)稀釋抗凝過的全血樣品。
4、小心沿著壁管,接近分離液層面,非常緩慢地加入新鮮的稀釋過的全血樣品在淋巴細(xì)胞分離液上面;(切記不要攪渾淋巴細(xì)胞分離液)
5、小心放進(jìn)離心機(jī)(水平轉(zhuǎn)子),4℃離心20-30分鐘,速度為400g-1000g;(注意:離心機(jī)剎車應(yīng)取消,需等待自然停止)
6、小心取出離管,切記不要震動(dòng);
7、可見上層為淡紅色透明血漿,其次為薄薄的只密白色環(huán),白色環(huán)衛(wèi)單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞。